脑脊液抽取最常见的是腰椎穿刺留取脑脊液，在特殊情况下也会经脑室穿刺，获取脑脊液。脑脊液的抽取一般会选取在腰椎的腰3/4或者腰4/5间隙，用腰穿针穿刺抽液比较安全。
在抽取脑脊液时采取侧卧位，低头、弯腰及双手环抱屈膝，使得腰椎间隙充分打开，在选取适当位置后，进行消毒、局麻、穿刺。
穿刺针由外到内依次经过皮肤、皮下组织、棘上韧带、棘间韧带、黄韧带和硬脊膜到达蛛网膜下腔，在此测得的压力一般是80~180mmH2O。
当一些特殊性疾病椎管内堵塞时，取得脑脊液常见的方式，可以通过侧脑室额角穿刺获取。在此获取脑脊液的创伤相对于腰椎穿刺的创伤要大。
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