李斯特菌的诊断除了结合临床表现之外，如果需要确诊的话，主要是依据病原学的检查，比如说可以做血以及其他标本的培养，以及脑脊液涂片以及脑脊液的培养等。
像李斯特菌溶素0的测定、抗体测定以及PCR的检测，其实对于急性病例的诊断并不是确定性的。而细菌、溶素0的这个氨基末端多肽，它具有一定的特异性抗原。如果进行这项检测的话，对于临床诊断意义相对来说是比较大的。
除此之外如果在新生儿败血症以及脑膜炎，还有就是血液肿瘤、艾滋病、器官移植的病人，发生一些典型的特点需要重点排除本病的感染。