大观霉素的主要作用是对淋病奈瑟菌有高度抗菌活性，对多种肠杆菌科细菌有中度抗菌活性。
大观霉素可与细菌核糖体30S亚单位结合，从而可抑制细菌蛋白质的合成。临床上这个药物主要用于治疗淋病奈瑟菌感染所致的泌尿系统疾病，还有对妥布霉素、庆大霉素、青霉素耐药的细菌感染，可使用大观霉素治疗。
如果对头孢菌素类或者青霉素类药物过敏的患者，也可使用大观霉素进行治疗。本药物使用需要注意，不能用作静脉滴注给药，故只能用于肌肉注射给药。